導讀: 4月23日中央(yang)要求各地要結合疫(yi)情防控(kong)和檢測(ce)需求,加強醫療衛生機構實驗室建(jian)設。三級(ji)綜合(he)醫院均(jun)應(ying)當(dang)建立符合(he)生(sheng)物安全二(er)級(ji)及以上標(biao)準的臨床檢(jian)驗(yan)實驗(yan)室(shi),具(ju)備(bei)獨(du)立開展新(xin)型冠病毒檢(jian)(jian)測(ce)的(de)能力(li);各級疾(ji)控(kong)機構(gou)和有條件(jian)的(de)專科醫(yi)院、二級醫(yi)院、獨(du)立設(she)置的(de)醫(yi)學檢(jian)(jian)驗(yan)實驗(yan)室也應當加強(qiang)實驗(yan)室建設(she),提高檢(jian)(jian)測(ce)能力(li)。對(dui)醫(yi)療資源相對(dui)缺乏、檢(jian)(jian)測(ce)能力(li)相對(dui)薄弱(ruo)、疫情(qing)防控(kong)壓力(li)較大的(de)地區,特別是陸路(lu)邊境口岸,要選擇1家綜(zong)合實力(li)強(qiang)的(de)縣級醫(yi)療機構(gou)予以重點支持,實現(xian)縣域內醫(yi)療機構(gou)具(ju)備(bei)核(he)酸檢(jian)(jian)測(ce)能力(li)。
臨(lin)(lin)床基因擴(kuo)(kuo)增實(shi)驗(yan)(yan)又稱 PCR實(shi)驗(yan)(yan),是(shi)專門用來(lai)檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)艾滋(zi)病(bing)(bing)(bing)、乙型肝炎(yan)、禽疫(yi)病(bing)(bing)(bing)等(deng)病(bing)(bing)(bing)毒(du)感染性疾病(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)(de)一種檢(jian)(jian)測(ce)(ce)手段。它(ta)可以通過將(jiang)病(bing)(bing)(bing)毒(du)體內(nei)所含(han)的(de)(de)(de)(de)基因進行擴(kuo)(kuo)增的(de)(de)(de)(de)方法(fa),測(ce)(ce)出(chu)一些病(bing)(bing)(bing)毒(du)含(han)量(liang)不高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)感染者體內(nei)是(shi)否含(han)有(you)特定(ding)的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)毒(du)。由(you)于該檢(jian)(jian)測(ce)(ce)方法(fa)可以測(ce)(ce)出(chu)普通檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)難以檢(jian)(jian)測(ce)(ce)出(chu)的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)毒(du)并具有(you)靈敏度高(gao)(gao)、特異性高(gao)(gao)、快捷、對樣品要求低等(deng)優點,因此被(bei)臨(lin)(lin)床醫生廣為認(ren)可,已廣泛(fan)應用于醫院的(de)(de)(de)(de)臨(lin)(lin)床診(zhen)斷和各防疫(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)部門的(de)(de)(de)(de)禽疫(yi)病(bing)(bing)(bing)診(zhen)斷。但是(shi),這種實(shi)驗(yan)(yan)需要有(you)能保證安全、配置合理(li)的(de)(de)(de)(de)實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)和非常(chang)規范的(de)(de)(de)(de)操作(zuo)為前提(ti)。近(jin)年來(lai)對臨(lin)(lin)床基因擴(kuo)(kuo)增檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)的(de)(de)(de)(de)建設(she)越(yue)來(lai)越(yue)得到重(zhong)視,因為它(ta)對檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結果的(de)(de)(de)(de)可靠性、準確性和安全性起(qi)到至關重(zhong)要的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用。本(ben)文主要從臨(lin)(lin)床基因擴(kuo)(kuo)增檢(jian)(jian)驗(yan)(yan)實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)的(de)(de)(de)(de)平面布局(ju),PCR實(shi)驗(yan)(yan)室(shi)基本(ben)流程進行了(le)介(jie)紹。
PCR實驗室布局圖
PCR實驗室原則上分為四個(ge)單(dan)(dan)獨的(de)工作區(qu)域:試劑(ji)制(zhi)(zhi)備(bei)區(qu)、樣本制(zhi)(zhi)備(bei)區(qu)、核酸擴增區(qu)、產(chan)物分析(xi)區(qu)。為避免(mian)交叉污染(ran),進(jin)入各個(ge)工作區(qu)域必須嚴(yan)格(ge)遵循單(dan)(dan)一(yi)方(fang)向(xiang)進(jin)行,即只能從試劑(ji)制(zhi)(zhi)備(bei)區(qu)→樣本制(zhi)(zhi)備(bei)區(qu)→核酸擴增區(qu)→產(chan)物分析(xi)區(qu)。各實驗區(qu)之間的(de)試劑(ji)及樣品(pin)傳(chuan)遞(di)應通(tong)過傳(chuan)遞(di)窗進(jin)行。
PCR實驗室基本流程
1.試劑制備區
功能:主要是作(zuo)(zuo)為貯(zhu)存試(shi)劑(ji)的制備、試(shi)劑(ji)的分裝和主反應(ying)混合液的制備,試(shi)劑(ji)和用(yong)于標本制作(zuo)(zuo)的材(cai)料應(ying)直(zhi)接運送(song)至(zhi)該區(qu),不(bu)得(de)經過其它(ta)區(qu)域。試(shi)劑(ji)原(yuan)材(cai)料需貯(zhu)存在本區(qu)內,并在本區(qu)內制備成所需的貯(zhu)存試(shi)劑(ji)。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
超凈工作臺 | 涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成(cheng) | 蘇州安泰、博科 |
生物安全轉運箱 | 待檢標本的轉運 | 上海颯凌 |
移液器 | 準確量取(qu)特定體積(ji)溶液20-100ul | 賽多利斯 |
藥品冷藏箱 | 短期保存 | 海信HC-5L75F 70L容積不占場地 |
試劑低溫冰箱 | 可(ke)選2-8℃、-20℃、-86℃ | 海信 HC-5L360/HCD-25L210/HD-86L390、HD-86L830BP |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐 MIX-30S |
迷你離心機 | 含(han)反應混(hun)合液的瞬時離(li)心(xin) | MINI-5k/8k/10k+ |
消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
滅菌鍋 | 實驗室(shi)物(wu)品、試劑、培(pei)養基消毒滅(mie)菌 | SHANAN |
天平(可選配) | 試劑配重 | 奧豪斯 |
2.樣本制備區
功能(neng):臨床標本(ben)的(de)保存、核酸(RNA、DNA)提(ti)取、貯存及其加(jia)入至擴(kuo)增(zeng)反應管和測定RNA時DNA的(de)合(he)成(cheng)。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
生物安全柜 | 為了防止有(you)害(hai)懸浮微粒、氣溶膠(jiao)的(de)擴散 | 上海力康/蘇州安泰 |
高速離心機 | 濃縮法:高速離心(xin)過柱 | 米歐- MC-15 15000r/min |
高速臺式冷凍離心機 | 用于收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉淀物。有些(xie)樣(yang)品(pin)由于在常溫下不太穩定,需(xu)要低溫環(huan)境。 | Thermo DH18R |
水浴箱 | 樣本56度滅活 | 米歐WT100-2 |
移液器 | 準確量取特定(ding)體積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
混勻儀 | 移取樣本前需要混勻 | 米歐- MIX-3000 |
金屬浴 | 用于DNA雜交過程中(zhong)控溫 | 杭州米歐DKT200-2 |
八連管離心機 | PCR體系瞬時離心 | 米歐 mini5k/8k/10k+ |
3.核酸擴增區
功能:主(zhu)要是DNA擴(kuo)增,已制備的DNA模(mo)板(ban)和合(he)成的DNA和主(zhu)反應混(hun)合(he)液,制備成反應混(hun)合(he)液等,也可以在(zai)本區域內(nei)進行。在(zai)PCR測(ce)定中,通常(chang)在(zai)擴(kuo)增后須打開反應管。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
熒光定量PCR儀 | 核酸定量分析 | 博樂/羅氏 |
核酸提取儀 | 樣品(pin)DNA/RNA提取 | 碩世/天能 |
移液器 | 準確量取特定體(ti)積溶液 | 賽多利斯 |
紫外燈/消毒車 | 空間環境消毒 | 申興光電 |
4.產物分析區
功能:主要進行的操(cao)作為擴增(zeng)片段的測定,如使用全自動封閉分(fen)析儀器檢測,此(ci)區域可不設。
品類 | 選型用途 | 推薦品牌 |
電泳儀 | 水(shui)平電(dian)泳(yong)用(yong)(yong)(yong)于核酸DNA/RNA檢(jian)測(ce)(ce),垂(chui)直電(dian)泳(yong)用(yong)(yong)(yong)于蛋白檢(jian)測(ce)(ce),轉(zhuan)印電(dian)泳(yong)用(yong)(yong)(yong)于將(jiang)蛋白轉(zhuan)印到(dao)膜上(shang)做western檢(jian)測(ce)(ce) | 伯樂、勤翔 |
凝膠(jiao)成像系統/紫外檢(jian)測儀 | 用(yong)于(yu)核酸瓊脂(zhi)電泳和(he)蛋白聚丙酰胺(an)的(de)觀察和(he)拍照;紫(zi)外(wai)分析儀用(yong)于(yu)染(ran)色后核酸瓊脂(zhi)電泳膠(jiao)觀察,不(bu)能(neng)連接電腦, | 勤(qin)翔 |
電爐 | 電(dian)泳(yong)瓊(qiong)脂(zhi)凝膠加熱融化 | 一恒 |
PCR實驗室設備解決方案是上海颯(sa)凌科(ke)技針對需要(yao)建立(li)PCR實驗室的(de)醫(yi)院提供(gong)的(de)整體解(jie)決方案,包括(kuo)PCR實驗室的(de)搭建、設(she)備(bei)配備(bei)及試劑的(de)選擇(ze)、檢測(ce)方法的(de)建立(li)等。目前(qian)熒(ying)(ying)光(guang)PCR技(ji)術(shu)(shu)從發展趨勢來看(kan),是各級醫(yi)院臨床所迫切需求的(de)一項(xiang)先(xian)進(jin)診斷技(ji)術(shu)(shu)。開(kai)展熒(ying)(ying)光(guang)PCR診斷項(xiang)目將有(you)利于醫(yi)院檢驗水平的(de)進(jin)一步(bu)提高,為傳(chuan)染性疾病的(de)診斷、預(yu)防、控制提供(gong)了一項(xiang)新的(de)有(you)效準(zhun)確的(de)檢測(ce)和控制手段。
另一方面,對于(yu)要升級為*的醫院,衛生(sheng)部有硬性要求,必須具備規范(fan)化的PCR實(shi)(shi)驗(yan)室,從這一方面來說,PCR實(shi)(shi)驗(yan)室的建設(she)對于(yu)醫院的建設(she)具有重要的意(yi)義。